ABTS denemesi
Bu, bir numunenin antioksidan kapasitesini belirlemek için spektrofotometrik bir ölçüm kullanan analitik bir yöntemdir. Formda renksiz bir madde olan ABST (2, 2'-azinobis (3-etilbenzotiyazolin-6-sülfonat) 'ın oksidasyonu yoluyla üretilen ABTS • + radikalini içeren bir çözeltinin emilimini ölçmek için bir UV-Vis spektrofotometresi kullanılır. radicalica, görünür aralıktaki karakteristik dalga boylarını emerek renklendirilir. Hem hidrojen hem de elektron transferi yoluyla etki edebilen ABTS • + çözeltisine antioksidan moleküllerin eklenmesi, radikalin renksiz forma indirgenmesini belirler. reaksiyon karışımının renk bozulmasına neden olur. Mevcut antioksidan miktarıyla orantılı olan bu renk değişikliği, belirli bir dalga boyunda (734 nm) belirli bir sürede absorbanstaki bir azalma olarak ölçülebilir. Antioksidan güç, karşılaştırmalı olarak ifade edilir. Referans standart olarak seçilen, genellikle askorbik asit veya Trolox olan bilinen bir miktardaki antioksidan molekül için ölçülen absorbans değerleri (bu durumda TEAC Trolox Eşdeğeri Antioksidan Kapasite antioksidan aktivitesinden söz edilir).
ABTS kullanımına dayanan antioksidan güç ölçümü, basit ve hızlı olma avantajına sahiptir. Ayrıca, hidrofilik ve lipofilik antioksidanların geniş bir pH aralığında ölçülmesini sağlar. Bununla birlikte, kullanılan radikalin (ABTS + +) fizyolojik olmadığı ve biyolojik sistemlerde bulunmadığı ve dahil olan farklı antioksidanların reaksiyon kinetiği nedeniyle ölçümün tekrarlanabilirlik problemlerinin sıklıkla vurgulandığı unutulmamalıdır.
FRAP (Antioksidan Gücü Azaltan Ferrik)
FRAP testi, demir iyonlarına karşı antioksidanların azaltma kapasitesini ölçer. Demir iyonlarının Fe3 + 'dan Fe2 +' ya geçtiği elektronların transferine dayanan bir yöntemdir. Belirli pH (3.6) koşulları altında ve TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazin) varlığında, bu iyonlar farklı özelliklere sahip kompleksler, özellikle indirgenmiş türevleri (Fe2 + -TPTZ), spektrofotometrik olarak ölçülebilen 593 nm'de maksimum emilimi olan mavi bir renk alır. Bu nedenle, bir antioksidan maddenin azaltma kapasitesi, bir standarda (örneğin askorbik asit) göre varyasyonla karşılaştırılmak üzere oluşturulan dalga boyunda oksidan içeren çözeltinin emilimindeki bir değişiklik olarak ölçülebilir.
FRAP testi, plazmanın azaltma gücünü ölçmek için tasarlandı, ancak daha sonra saf bileşiklerin ve karmaşık matrislerin antioksidan kapasitesini test etmek için uyarlandı. Aslında, bu yöntem yalnızca hidrojen transferi yoluyla etki eden antioksidanların etkisini göz ardı ederek elektron transferi yoluyla azaltma kapasitesini değerlendirmeye izin verdiği için, antioksidan rolü oynayan tiyoller ve proteinler gibi moleküllerin katkısının ölçülmesine izin vermez biyolojik sıvılarda temel (örneğin kan). Bu yöntemi kullanmanın avantajı, in vitro antioksidan kapasiteyi belirlemek için en basit, en hızlı ve en ucuz yöntemlerden biri olmasıdır.
TEST DPPH
2, 2-difenil-1-pikrilidrazil (DPPH), antioksidan kapasiteye sahip bir molekül varlığında azaldığında renklenen, yoğun bir kırmızı-mor renk ile karakterize yoğun bir ticari olarak temin edilebilir azot radikalidir. Bir antioksidan bileşik ile reaksiyondan sonra DPPH çözeltisinin absorbans varyasyonunun 517 nm'de spektrofotometrik olarak ölçülmesiyle, test maddesinin hidrojen transferiyle mi yoksa elektron transferiyle mi hareket ettiği ile azaltma kapasitesini ölçmek mümkündür. Sonuç genellikle IC50 olarak ifade edilir, yani DPPH'nin başlangıç konsantrasyonunu% 50 azaltabilecek antioksidan miktarı.
Hızlı, basit ve ekonomik bir yöntemdir. Bu analitik tekniğin sınırları, test sonuçlarının DPPH radikaliyle aynı dalga boyu aralığında ya da sterik olarak toplanmamış büyük moleküllerin varlığında emmesi durumunda tahrif edilme olasılığı ile verilmektedir. Kökün reaktif kısmı ile reaksiyona girerler. Bu, DPPH'nin peroksil radikallerinden 1000 kat daha yavaş antioksidanlarla reaksiyona girdiğini belirler.
PCL TESTİ (Fotokemilüminesans)
PCL testi, belirli bir kök türünün, fotokimyasal olarak UV ışımasıyla üretilen süperoksit anyonunun (O2 - -), kemilüminesans yayan bir bileşikle reaksiyonuna dayanır. Kullanılan marker, serbest radikaller tarafından oksitlendiğinde, özel bir alet (Photochem®) kullanılarak ölçülebilen bir ışık yayan bir molekül olan lümenoldür. Rasyon karışımındaki antioksidanların varlığı, kemilüminesans emisyonunu inhibe ederek radikal türleri etkisiz hale getirir. PCL analizi çok hızlı ve hassastır. Ayrıca, ACW (Antioksidan Kapasiteli Suda Çözünür) ve ACL (Antioksidan Kapasiteli Lipitte Çözünür) olarak adlandırılan iki farklı analitik protokolün uygulanmasıyla, hem suda çözünür bileşenin (flavonoidler, vitamin) toplam antioksidan kapasitesine katkılar aynı bileşik için ölçülebilir C, amino asitler, vb.) Liposoluble olanlardan (tokoferoller, tokotrienoller, karotenoidler, vb.). Standart referans moleküller, ACL protokolü için askorbik asit ve ACW protokolü için Trolox ile ilgili ölçümlerle kaydedilen değerlerin karşılaştırılması için, test ürününün antioksidan kapasitesi elde edilir.
