genellik
İmmünofiksasyon, biyolojik bir örnekte bulunan gama globülinlerin tanımlanmasına ve yazılmasına izin veren bir laboratuar testidir.
Ayrıntılı olarak, analiz çalışmayı sağlar - kanda veya hastanın idrarında - immünoglobulin sınıflarını (IgA, IgG, IgM, IgE veya IgD) ve spesifik elektroforetik hareketliliklerine göre hafif zincir kappa veya lambda türlerini . Daha sonra, hangi gama globülinin katıldığı tanımlanması için immünofiksasyon, fragman veya karşılık gelen antikor için spesifik antijenlerin aşılanmasını içerir ( anti-immünoglobulin antiserum ): şüpheli değişikliğin varlığı formasyon ile teyit edilir çıplak gözle görülebilen veya mikroskop altında görünen bir çökeltinin
Bu bilgi, özellikle plazma hücresi hastalıklarının (gamopati veya plazma hücresi diskrazisi) teşhisinin saptanması için büyük önem taşımaktadır. İmmünokiksasyon, multipl miyelom, Waldenström makroglobulinemi ve primer amiloidozun (hafif zincir amiloidoz olarak da bilinir) değerlendirilmesi ve izlenmesi için çok faydalıdır.
ne
İmmünofiksasyon (veya immünoelektroforez, aynı zamanda IFE kısaltması ile de kısaltılır), hangi sınıfta immünoglobülinlerin (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) veya hafif zincir kappa veya lambda tipinin mevcut olup olmadığını belirleyebilen bir tekniktir. Kan serumu ve hastanın idrarında fazlalık veya kusur.
Hafif zincirler kappa ve lambda, monoklonal bileşeni, yani aynı kimyasal yapıya sahip antikorları karakterize eder.
Sierik ve İdrar İmmunofiksasyonu: Ne zaman belirtilir?
Plazmacelüler disrasya veya gamopatiler, etiyolojisi bilinmeyen, heterojen bir grup bozukluktur, özelliği:
- B hücrelerinin bir klonunun çoğalması orantısızdır ;
- Yapısal ve elektroforetik olarak homojen ( monoklonal ) bir tür immünoglobulin (veya bunun polipeptit alt ünitesinin) serumunda ve / veya idrarında bulunma.
Normal olarak, plazma hücre disrazileri serum ve idrar proteini elektroforezi, ardından serum immünofiksasyonu (IFE) kullanılarak teşhis edilir.
Aynı zamanda, toplam immünoglobulin konsantrasyonunu (IgG + IgM + IgA) ölçmek için bir kan testi verilebilir.
Daha fazla bilgi için: İmmünoglobülinler - Nedir, Neyi Ölçerler ve Referans Değerleri »İmmunofiksasyon: temel prensip
İmmünofiksasyon iki fazlı bir incelemedir (önce agaroz jel elektroforezi, sonra spesifik antiserumlarla immünopresipitasyon ).
İmmünofiksasyonun ilk basamağı, proteinlerin (veya protidogrammaların) ELEKTROFORİZİSİNDEKİ ile aynıdır, bu nedenle bazı kavramları hatırlamak gerekir:
- Elektroforez, kan serumunda veya diğer biyolojik numunelerde bulunan protein miktarını belirlemeye izin veren ve her fraksiyon için kalite açısından herhangi bir anormallik olup olmadığını ortaya koyan bir laboratuvar analizidir. Özellikle, bu test proteinleri beş gruba ayırmaya izin verir: albümin, alfa 1 globülinler, alfa 2 globülinler, beta globülinler ve gama globülinler ; sonuncusu immünofiksasyon ile daha spesifik olarak araştırılır.
- Elektroforez, elektriksel olarak yüklü parçacıkların farklı göç hızlarına dayanan, bir çözelti ve bir inert destek ortamı yoluyla, bir elektrik akımının etkisi altında, doğru bir akım tarafından üretilen bir ayırma yöntemidir . Uygulamada test, elektrik yükünden ve hastanın numunesinde mevcut olan proteinlerin moleküler kütlesinden faydalanır . Bir elektrik alanın dürtüsü altında, bu makromoleküller, karakteristik olarak strese cevap vererek, türlerine göre "gruplanır". Sonuç ( elektroforetik kalıp ), protein fraksiyonlarının karşılık geldiği çeşitli tepe ve eğrilerden oluşur. Normal olarak, ilk tepe, daha yüksek ve daha dar, albümininkidir ; takip etmek için, globülinlerin tepeleri, albüminden çok daha düşük gözlenir. İz içerisinde oluşan piklerin şiddeti ve genliğindeki artış veya azalış, her bir kategorideki proteinlerin daha büyük veya daha az olduğunu gösterir; Bir bantta ne kadar fazla protein bulunursa, ilgili tepe o kadar yüksek olur. Gama globülinleri durumunda, farklı sınıfların her birinin miktarını (IgA, IgM, IgG vb.) Bilmek istiyorsanız, tek doza başvurmanız gerekir. Genel olarak, bir bantta ne kadar fazla gama globülin bulunursa, ilgili tepe o kadar yüksek olur; yükseklik, belirli bir kategoriye ait toplam protein miktarına karşılık gelir.
IMMUNOFISSAZIONE öngörüyor:
1) Agaroz Jeli Elektroforezi : hasta numunesi (serum veya idrar) bir elektroforetik şerit üzerinde, yani göç desteği (genellikle agaroz jeli) üzerinde biriktirilir. Doğru akım tarafından oluşturulan elektrik alanın uygulanmasıyla farklı bantlarda ayrılma sağlanır. Uygulamada, karışımda bulunan (hastanın örneğindeki) her tür gamma globulin moleküler kütleye ve elektrik yüküne göre göç eder. Gama globülinlerin farklı elektroforetik mobilitesi, bunların (her biri elektroforetik yoldaki belirli bir bantla çakıştığı) tanımlanmasını ve herhangi bir anomalinin gözlenmesini mümkün kılar.
2) Spesifik Antiserumlarla İmmünopresipitasyon (Fiksasyon) : Belirli bir antikora veya fragmana özgü antijenler (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-hafif kappa veya anti-zincir ) her elektroforetik şeride ayrı ayrı eklenir. lambda hafif zincir). Bir monoklonal protein mevcutsa, antijenin karşılık gelen antikorla etkileşimi, dar bir bant (sonucun pozitif olduğu anlamına gelir) ve çıplak gözle görülebilen veya mikroskop altında görünen bir çökeltinin oluşmasını sağlayacaktır. Son olarak, numune, çökelmemiş proteinleri çıkarmak, jelin kurutulmasını sağlamak ve sonuçların okunmasıyla devam etmek için işlenir (yani yıkanır ve renklendirilir).
Neden evet
İmmünofiksasyon ne içindir?
Serum immünofiksasyonu, özellikle monoklonal bileşenin ( monoklonal gamopati ) üretilmesiyle ilgili olarak, gama globülinin değiştirilmesi ile karakterize hastalıkları teşhis etmek veya izlemek için belirtilen bir testtir.
Daha fazla bilgi için: Monoklonal Gammopatiler - Ne ve ne oldukları »İmmunofiksasyon şüpheli plazmeselüler disrazi vakalarında faydalıdır ve MIELOMA (ve ilgili hastalıklar) ve MGUS'un ("belirsiz anlamdaki monoklonal gammapatisi") kısaltması için önemlidir.
Bu inceleme aynı zamanda Waldenström makroglobulinemi ve hafif zincir amiloidozunun ( AL ) değerlendirilmesine de izin verir.
İmmunofiksasyon: Sınav ne zaman yapılır?
İmmünofiksasyonun endikasyonu, serum veya idrarda monoklonal antikorlarda veya immünoglobulinlerde değişiklik şüphesini artıran klinik veya laboratuvar bulgularından sonradır.
Örneğin, bu test seropro- veya idrar elektroforezinin sonucunu derinleştirmeye izin verir: elektroforetik yoldayken, gama globülinlere karşılık gelen bantlar normallikten saptığında, immünofiksasyon, bu proteinlerden hangisinin miktar olarak değiştirildiğini tanımlar. ve kalite
Özet olarak, serum immünofiksasyonu önerilebilir:
- Diğer laboratuar testlerinin normal olmayandan daha düşük veya daha yüksek miktarlarda plazma proteinlerinin olmaması veya anormal olması durumunda;
- Örneğin, bir monoklonal bileşen üretimi ile karakterize edilen hastalıkların varlığından şüphelendiğimizde:
- Multipl miyelom ve varyantları;
- Waldenström makroglobulinemi;
- Amiloidoz;
- Hastada monoklonal gamopati veya multipl miyelom varlığından şüphelenilen belirtiler ve işaretler varsa, örneğin:
- Kemik ağrıları;
- Anemi;
- Kolay yorulma;
- Tekrarlayan enfeksiyonlar;
- Açıklanamayan kırıklar.
Multipl miyelom durumunda, protein elektroforezi ve immünofiksasyon da hastalığın ilerlemesini izlemek için çok yararlıdır (takip).
İmmünofiksasyon: hangi örnekler üzerinde yapılabilir?
İmmünofiksasyona maruz kalabilecek biyolojik numuneler temel olarak:
- Serum (serum immünofiksasyonu);
- İdrar (idrar immünofiksasyonu);
- Likör * (likör immünofiksasyonu).
* Not : beyin omurilik sıvısı veya sıvısı, beyin, omurilik, kranyal sinirler ve omurilik köklerine nüfuz eden ve onu koruyan sıvıdır.
Normal değerler
Monoklonal veya poliklonal gama globülinler için serum ve idrar immünofiksasyonunun NEGATİF bir sonucu NORMAL olarak kabul edilir.
Globülin aralığı
Gama globulinler, toplam plazma proteinlerinin % 9-20'sini oluşturur .
- Referans değer Gamma globulinler : 0.9-1.4 g / dl
İmmünoglobulinlerin toplam konsantrasyonuyla ( IgG + IgM + IgA ) ilgili olarak, 600 ila 2300 mg / dl arasındaki değerlerin normal olduğuna inanılmaktadır.
- Referans değeri Serumdaki Immunogobulin :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0.3-0.4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Not : Sınavın referans aralığı analiz laboratuvarında kullanılan yaşa, cinsiyete ve enstrümana bağlı olarak biraz değişebilir. Bu nedenle, doğrudan raporda bildirilen aralıklara başvurmak tercih edilir. Ayrıca, analiz sonuçlarının bir bütün olarak hastanın anamnestik görüntüsünü bilen pratisyen tarafından değerlendirilmesi gerektiği de unutulmamalıdır.
Yüksek Değerler - Nedenleri
Gama globulinlerinde artış şunlar olabilir:
- Poliklonal, eğer immünoglobülinlerin üretimi heterojen ise, yani farklı plazma hücrelerinden üretilen veya elde edilen globülin aralığının tüm bileşenleri artıştan etkilenir;
- Monoklonal, gamma globülinleri, tek bir tip plazma (klon) plazmasından üretildiğinde veya elde edildiğinde.
Poliklonal globülin aralığındaki artış şunlarla ilişkilendirilebilir:
- Kronik inflamatuar hastalıklar;
- Romatoid artrit;
- Sistemik lupus eritematozus;
- Karaciğerin kronik hastalıkları (hepatit ve siroz gibi);
- Akut ve kronik enfeksiyonlar;
- Son bağışıklamalar;
- Bazı kanser hastalıkları.
Yüksek monoklonal globulin gama değerleri bunun yerine, aşağıdakilerin varlığını gösterebilir:
- Bazı neoplazmalar ve kronik iltihaplar;
- Multipl miyelom;
- lenfoma;
- Waldenström'ün Makroglobulinemi.
Fazla miktarda gama globulin hipergamaglobulinemi, eksiklik ise hipogamaglobülinemi olarak bilinir.
Düşük Değerler - Nedenleri
Gama globülinlerin azaltılması, agamaglobülinemi veya ikincil bir immün yetmezlik (örneğin, AIDS, böbrek yetmezliği, akut sepsis ve Cushing sendromu) dahil, immün sistemin çeşitli genetik hastalıklarının varlığını gösterebilir.
Gama globulin değerlerinde azalma ayrıca sitostatik ilaçların, immünosupresanların ve steroidlerin alımına da bağlı olabilir.
Nasıl yapılır?
Sierik İmmünofiksasyon
Serum immünofiksasyonu, bir kol damarından kanın basit bir şekilde alınmasını içerir. Serum biyolojik numunenin santrifüjlenmesiyle elde edilir; bu aslında hücreleri (fraksiyonel kısım) içeren fraksiyonun kanın sıvı kısmından (plazma) ayrılmasını sağlar. Kan serumu pıhtılaşma faktörlerinden arındırılmıştır (fibrinojen, faktör VIII, faktör V ve protrombin).
İdrar immünofiksasyonu
İdrar immünofiksasyonunu yapmak için özel bir steril kapta az miktarda idrar toplamak gerekir. Hekim ve laboratuar endikasyonlarına göre, numune kesin bir zamanlama olmadan ( rastgele ) veya 24 saat içinde toplanabilir.
Likörün İmmünofikasyonu
Analiz, spinal boşluğa bir iğne sokarak az miktarda beyin omurilik sıvısının çıkarılmasını gerektirir ( lomber ponksiyon ).
hazırlık
İmmunofiksasyon: Sınava nasıl hazırlanılır?
- Kan örneklemesinden önce, bazı laboratuvarlar en az 10-12 saatlik bir açlık gerektirebilir. Bu süre zarfında az miktarda su almasına izin verilir.
- İmmünofiksasyon, günün belirli bir saatinde (rastgele) veya 24 saat boyunca toplanan idrarda gerçekleştirilebilir, bu nedenle önceden uygun steril kapların elde edilmesi gerekir.
- Ancak, likörün immüno-karıştırılması ile ilgili olarak, özel bir hazırlık gerekmemektedir.
Sınavın sonucunu ne değiştirebilir?
Bazı ilaçlar immünofiksasyonun sonucunu etkileyebilir, bu nedenle devam etmekte olan farmakolojik tedavileri doktora bildirmeniz önerilir.
İncelemeden önceki altı ay içinde aşıların verilmesi (bağışıklama) ve fenitoin, prokainamid, oral kontraseptifler, metadon ve terapötik gamma-globülinler gibi ilaçların kullanımı, immünoglobülinlerin konsantrasyonunu artırabilir. Test sonucunu değiştirebilen diğer ilaçlar kortikosteroidler, neomisin, asetilsalisilik asit ve klorpromazindir.
Sonuçların Yorumlanması
İmmünofiksasyonun sonucu, diğer analizlerin sonuçları ile birlikte değerlendirilir. Bulgunun yorumlanması, belirli hastalıklara spesifik bir gama globülini (örneğin, immünoglobulinler G ile çakışan bant) tanımlayabilen ve rapor edebilen genel pratisyen veya referans uzmanına aittir. Bu değerlendirme tanı hipotezini onaylar veya destekler: genel olarak immünofiksasyon normal bir gama globulin profilini ortaya çıkarabilir veya bir monoklonal protein veya poliklonal bir model tanımlayabilir.
Hastalık tanımlandıktan sonra, immünofiksasyon şu şekilde yapılabilir:
- Zamanla hastalığı izleyin, ardından seyri takip edin (takip);
- Terapötik protokolün etkinliğini doğrulayın .
İmmunofiksasyonun Artıları ve Eksileri
Protein elektroforezi ile karşılaştırıldığında, immünofiksasyon:
- Daha hızlıdır : immünofiksasyonun sonuçları genellikle üç saat içinde elde edilir;
- Daha hassastır (biraz da olsa): immünofiksasyon, özellikle düşük konsantrasyonlarda (1 gram / litreden az) protein elektroforezinden hariç tutulan bir immünoglobulini açığa çıkarabilir.
Ayrıca, immünofiksasyon:
- Kısmen otomatikleştirilebilir ;
- Kolayca okunabilir ve yorumlanabilir .
Bununla birlikte, immünofiksasyon, protein elektroforezinden daha pahalıdır ve sadece gama globulin analizine izin verir.
Normal sonuç
İmmunofiksasyonda normal bir yol şunları içerir:
- Koyu immünoglobulin G ( IgG ) ile çakışan bir bant;
- Daha hafif immünoglobulin A'ya ( IgA ) karşılık gelen bir bant;
- İmmünoglobulin M ( IgM ) için bandın yokluğu;
- Kappa bandı, lambdadan (hafif zincir) 2: 1 oranında daha yoğundur.
Normal bir sonuçta, bantlar büyüktür ve rengin yoğunluğunda immünoelektroforez şeridinin kenarlarına doğru kademeli ve homojen bir azalma vardır.
Poliklonal gama globülinler
Bazı durumlarda, immünofiksasyonun tüm bantları aynı derecede homojen olarak gizlenir. Bu model poliklonal immünoglobulinlerin varlığını temsil eder. Yine bu durumda, bantlar büyüktür ve immünoelektroforetik şeridin kenarlarına geçiş aşamalı olarak gerçekleşir. IgM bandı - normal olarak yoktur - geniştir.
Monoklonal gama globülinler
İmmünofiksasyon yolunda keskin kenarlı dar bir bant tanımlanabildiği zaman, monoklonal bileşenlerin aranmasının pozitif olduğu anlamına gelir.
Bir monoklonal immünoglobulinin tanımlanması, aşağıdaki durumların tanısında faydalıdır:
- Belirsiz bir öneme sahip monoklonal gamopati (MGUS);
- Multipl miyelom;
- Waldenstrom makroglobulinemi;
- Amiloidoz.
Ayrıca, plazma hücre diskrazilerinde (yani multipl miyelom ve Waldenstrom makroglobulinemi) tedaviyi izlemek için immünofiksasyon kullanılabilir. Monoklonal protein seviyesi kemoterapiden sonra azalır veya tespit edilemezse, tedaviye bir yanıt gösterebilir. Aksine, tedaviye rağmen inatçı bir monoklonal protein refrakter hastalık belirtisidir .
Not İmmünofiksasyondaki negatif bir sonuç, her zaman bir plazmacelin drasrasisini hariç tutmaz. Örneğin, bir çok salgılayıcı olmayan ya da oligosekretor çoğul miyelom hem idrarda hem de serumda negatif sonuçlar verebilir. Bu nedenle, gamopati için tanısal şüphe hala yüksekse, Light Kappa / Lambda Libere Zincirlerinin ( K / L oranı ) oranının belirlenmesi belirtilir.
İmmünofiksasyon ve Multipl Skleroz Tanısı
Beyin omurilik sıvısının (BOS) immünofiksasyonu, doktor multipl skleroz varlığından şüphelendiğinde reçete edilir. Bu durumda, belirlenen iz oligoklonal bantların varlığını vurguladığından karakteristiktir. Sonuç, laboratuvar bulgusunda pozitif olarak bildirildi. Bantların normal olarak intratekal gama globülinlerin üretimi ile korele oldukları için serum immünofiksasyonunda gözlenmediği düşünülmelidir.
Bununla birlikte, bu bulguların, serebrospinal sıvıdaki oligoklonal bantlarda mevcut olabileceğinden, tanıyı kesin olarak doğrulamayacağına dikkat edilmelidir.
Başka bir deyişle, oligoklonal bantların likörün immünofikasyonu ile tanımlanması, multipl skleroz tanısını desteklemek için çok faydalıdır, ancak başka araştırmalarla onaylanması gerekir . Bu sonuçları sağlayabilen diğer koşullar, aşağıdakileri içeren merkezi sinir sisteminin iltihaplanmasıdır : HIV ile ilişkili ensefalit, nörosifilis, nörosarkoidoz, Lyme meningoensefaliti, CNS malign tümörleri, optik nöromyelit ve transvers miyelit.
