Serbest radikaller ve antioksidan sistemler arasında uygun bir dengeyi korumak için, vücuda dıştan antioksidan özelliklere sahip antioksidan özelliklere sahip yeterli miktarda molekül tedarikini sağlamak, antioksidan bariyerden oluşan radikallere karşı doğal savunmaların tükenmesini önlemek için önemlidir. Biyomolekülleri işlevselliklerini tehlikeye atan reaktif türlerin saldırganlığına maruz bırakmak.
Bu maddelerden zengin besinler tüketerek veya hedeflenen takviyeler yoluyla diyetle alınabilen antioksidan moleküller sayısızdır ve polifenolleri, vitaminleri, karotenoidleri ve diğer birçok maddeyi içerir. Bu bileşikler serbest radikallerle reaksiyona girebilir, reaktivitelerini azaltır ve vücuttan kolayca elimine edilen daha az tehlikeli moleküller üretir.
Antioksidanların, reaksiyona dahil olan radikalin tipine bağlı olarak farklı mekanizmalarla ve farklı verimle hareket ettiklerini dikkate almak da önemlidir. Aslında her antioksidan, kontrast etkisini birkaç spesifik radikal üzerinde gerçekleştirebilir, bu nedenle eksojen antioksidanların katkısının mümkün olduğu kadar değişken olması gerekir, böylece farklı moleküller tamamlayıcı bir şekilde veya Biyomoleküllerin farklı türdeki radikal türlerin oksidasyondan korunmasında sinerji.
Bu bağlamda, araştırmanın dikkati, antioksidanların hücreleri koruduğu mekanizmaların derinleşmesine odaklanmıştır. Özellikle, herhangi bir risk durumunu hedeflenen şekilde düzeltebilmek için diyetle birlikte verilen antioksidanların miktarını veya antioksidan engelin etkinliğini ölçmek çok önemlidir.
Bir maddenin antioksidan etkinliğini ölçmedeki ana zorluk, oksidatif stresin belirlenmesinde rol oynayan serbest radikal türlerinin sayısız olmasıdır ve farklı hız ve mekanizmalara sahip biyomoleküller ile reaksiyona girmesidir. Serbest radikallerin farklı doğası nedeniyle, bir bileşiğin, özellikle de gibi karmaşık matrislerle uğraşırken, reaktif türlerin oksitleyici etkisine karşı koyma kabiliyetini tek yönlü bir şekilde ölçmeyi sağlayan bir analiz yönteminin belirlenmesi son derece zordur. kan, yiyecek veya bitki özleri. Aslında serbest radikaller, hedef biyomolekül tipi için, etki ettikleri biyolojik matris ve kimyasal-fiziksel afinite (lipofilik veya hidrofilik çevre) için ve ayrıca oluşturuldukları mekanizma için reaktivite bakımından farklılık gösterir.
Ayrıca, ölçülen verileri farklı maddelerle karşılaştırmak için, kullanılan yöntemleri mümkün olduğunca standartlaştırmaya çalışmak önemlidir. İdeal bir analitik yöntem, sonuçların iyi bir şekilde tekrarlanabilirliğini garanti etmek için öncelikle basit ve kolayca tekrarlanabilir olmalıdır. Ayrıca, organizmada meydana geleni mümkün olduğunca in vitro olarak organizmada simüle etmek ve etkileşimi minimuma indirmek için açık ve bilinen mekanizmalarla reaksiyona giren biyolojik olarak önemli radikalleri kullanmalıdır. Son olarak, hem hidrofilik hem de lipofilik maddelerin ölçümüne izin vermek için ideal bir test çok yönlü olmalıdır.
Şu anda tarif edilen özelliklere cevap veren bir bileşiğin antioksidan gücünü ölçmek için tek bir geçerli yöntem yoktur. Bu nedenle, sonuçların kendilerinin nihai kullanımını da dikkate alan bir uzlaşmaya varmak için mekanizmalara ve farklı radikal türlere dayanan birkaç makalenin sonuçlarının kombinasyonuna başvurmak gerekir.
Antioksidanlar çok farklı kimyasal-fiziksel özelliklere sahip çok geniş bir bileşik ailesini temsil ettiğinden, sadece en uygun ölçüm yöntemlerinin seçimi için değil, aynı zamanda en uygun ekstraksiyon protokolünün kullanımı için neden ölçmek istediğinizi belirleyin. ve karmaşık bir matristeki tüm antioksidanları çıkarabilen ve aynı zamanda sonuçları bozabilecek potansiyel parazitlerin varlığını en aza indiren bir ekstraksiyon tekniği yoktur.
ANALİTİK YÖNTEMLER
Bir bileşiğin, hücreleri ve dokuları oksidatif strese karşı koruma yeteneğini değerlendirmenin en doğrudan yolu, aynı bileşiği aldıktan sonra kanın antioksidan kapasitesini ölçmektir, yani, bütün bunları içeren antioksidan bariyeri güçlendirme etkinliği; kanda bulunan antioksidan maddeler. Ayrıntılı testler genellikle çok özel özelliklere sahiptir ve iyi tanımlanmış koşullarda belirli bir antioksidan tipinin etkisini ölçebilir. Bununla birlikte, kanda bulunan farklı antioksidanlar ayrı hareket etmez, ancak serbest radikallerin saldırganlığa karşı en iyi korumayı sağlayan bir sinerji oluşturmak için sıkı bir şekilde birbirine bağlı bir eylem gerçekleştirir. Bu nedenle, toplam antioksidan kapasitenin gerçek ölçüsü, tek tek bileşenlerin antioksidan kapasitesinin yalnızca toplamına indirgenemez ve biyolojik sıvılarda antioksidan sistemlerin genel etkisinin tek bir analizle belirlenmesi imkansızdır.
Alternatif bir yol, diyetle birlikte alınan eksojen maddelerin antioksidan gücünü ölçmektir (besin ve takviyeler). Bununla birlikte, bu durumda, bunun, bir bileşiğin antioksidan potansiyelinin bir ölçüsü olduğu not edilmelidir, bunun sadece biyolojik kompartmanlarda serbest radikallerin saldırısına karşı gerçek bir koruyucu etki gösterme kabiliyetinin yaklaşık olarak tahmin edilmesini sağlar. Kantitatif olarak, antioksidanlar bulunur, fakat biyolojik kullanılabilirliği ve organizmaya getirildiğinde etkinlikleri hakkında herhangi bir bilgi vermez.
Antioksidan kapasiteyi ölçme yöntemleri, reaktivitelerini etkisiz hale getirmek için serbest radikallerle reaksiyona girdikleri mekanizmaya bağlı olarak iki kategoriye ayrılabilir:
- Bir maddenin, bir hidrojen atomunun radikal türlere salınması ile antioksidan etkisini gerçekleştirme kabiliyetine dayanan HAT (Hidrojen Atom Transferi) yöntemleri;
- Bir maddenin elektron transferiyle serbest radikalleri azaltma kabiliyetini değerlendiren SET (Tek Elektron Transferi) yöntemleri.
Kullanılan analitik yöntemlerin bazıları her iki mekanizma ile da hareket edebilmektedir.
Şu ana kadar söylenenlere dayanarak, antioksidan ve anti-radikal kapasitenin belirlenmesi için geliştirilen test sayısının çok yüksek olduğu açıktır, bu yüzden en yaygın ve önemli olanı, güçlü yönlerini ve sınırlarını vurgulamaya çalışacağız. .
